

我给你一张已经成型的技术路线图作为参考模板。请严格按照这张图的整体结构和逻辑顺序来组织内容,把对应的研究内容填入到合适的位置即可。各模块之间逻辑清晰、衔接自然,纵向布局,学术配色,结构紧凑。不需要额外解释,只输出完整的技术路线图内容。主题为“外源性乳酸调控糖酵解-H3K18la轴影响Tfh细胞分化及在SLE中的机制研究”。图表包含三个模块从上到下排列:模块1(顶部):表型验证。 ①体外Tfh分化:人/鼠naïve CD4+ T细胞磁珠分选,Tfh极化加乳酸,“流式检测Tfh比例、ICOS、Bcl6,CFSE/Annexin V检测增殖凋亡”;②体内SRBC免疫:“小鼠SRBC免疫+乳酸钠,流式检测Tfh/GCB”;③组织/细胞内乳酸检测:收集脾脏及极化Tfh细胞,试剂盒测定乳酸浓度。模块2(中部):机制探索。 ①糖酵解代谢:Seahorse检测“ECAR”/OCR,Western blot测“PKM2/HK2及PI3K-Akt-mTOR”,¹³C-葡萄糖示踪+LC-MS测代谢物,“鱼藤酮恢复后流式测Tfh”;②H3K18la修饰:“CUT&Tag-qPCR测靶基因富集”,CUT&Tag-seq+RNA-seq整合,“抑制剂”/siRNA筛选关键酶,ChIP-qPCR/RT-qPCR验证;③细胞状态依赖性:乳酸时间梯度测胞内乳酸和H3K18la,胰岛素/2-DG代谢切换后流式测Tfh;④乳酸转运:FITC-乳酸示踪摄取动力学,共聚焦观察分布及共定位,WB测MCT1,AZD3965抑制实验,Bm12小鼠注射FITC-乳酸后流式测T细胞摄取。模块3(底部):治疗验证。 ①临床样本:SLE患者及对照血清/PBMC,检测“乳酸”、糖酵解活性、PKM2/HK2、mTOR、“H3K18la、MCT1”,与SLEDAI/尿蛋白相关性;②动物模型:Bm12狼疮小鼠六组(对照、乳酸钠、AZD3965、MS-275、乳酸钠+AZD3965、乳酸钠+MS-275),检测抗dsDNA、尿蛋白、肾脏病理、脾脏Tfh H3K18la;③机制与安全:分离脾CD4+ T细胞测糖酵解、H3K18la、Tfh基因,检测血清抗dsDNA、肾脏病理评估免疫毒性。连接元素:使用箭头连接模块。把其中的module去掉,引号内的文字请改为红色字体,尽量避免模块内不必要的箭头
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