

请生成一张适合A4页面的竖版技术路线图,。各模块之间逻辑清晰、衔接自然,纵向布局,学术配色,结构紧凑。不需要额外解释,只输出完整的技术路线图内容。请生成一张技术路线图,主题为“外源性乳酸调控糖酵解-H3K18la轴影响Tfh细胞分化及在SLE中的机制研究”。图表包含三个模块从上到下排列:模块1(顶部):表型验证。 ①体外Tfh分化:人/鼠naïve CD4+ T细胞磁珠分选,Tfh极化加乳酸,流式检测Tfh比例、ICOS、Bcl6,CFSE/Annexin V检测增殖凋亡;②体内SRBC免疫:小鼠SRBC免疫+乳酸钠,流式检测Tfh/GCB;③组织/细胞内乳酸检测:收集脾脏及极化Tfh细胞,试剂盒测定乳酸浓度。图标建议:细胞培养皿、流式细胞仪、小鼠、乳酸分子。模块2(中部):分子机制与状态依赖性。 ①糖酵解代谢:Seahorse检测ECAR/OCR,Western blot测PKM2/HK2及PI3K-Akt-mTOR,¹³C-葡萄糖示踪+LC-MS测代谢物,鱼藤酮恢复后流式测Tfh;②H3K18la修饰:CUT&Tag-qPCR测靶基因富集,CUT&Tag-seq+RNA-seq整合,抑制剂/siRNA筛选关键酶,ChIP-qPCR/RT-qPCR验证;③细胞状态依赖性:乳酸时间梯度测胞内乳酸和H3K18la,胰岛素/2-DG代谢切换后流式测Tfh;④乳酸转运:FITC-乳酸示踪摄取动力学,共聚焦观察分布及共定位,WB测MCT1,AZD3965抑制实验,Bm12小鼠注射FITC-乳酸后流式测T细胞摄取。图标建议:Seahorse、WB条带、质谱、DNA、酶、抑制剂、共聚焦显微镜、转运体。模块3(底部):治疗验证。 ①临床样本:SLE患者及对照血清/PBMC,检测乳酸、糖酵解活性、PKM2/HK2、mTOR、H3K18la、MCT1,与SLEDAI/尿蛋白相关性;②动物模型:Bm12狼疮小鼠六组(对照、乳酸钠、AZD3965、MS-275、乳酸钠+AZD3965、乳酸钠+MS-275),检测抗dsDNA、尿蛋白、肾脏病理、脾脏Tfh H3K18la;③机制与安全:分离脾CD4+ T细胞测糖酵解、H3K18la、Tfh基因,检测血清抗dsDNA、肾脏病理评估免疫毒性。图标建议:血液样本、相关性图、小鼠、肾脏病理、柱状图。连接元素:使用箭头
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