简约风基因研究实验分析插画素材

请根据以下流程生成一个包含中文文字的研究技术路线图，要求相对简洁，只有框、引导线和文字，无多余插图： 1.起始：从ClinVar和HGMD收集243个MMACHC基因变异。 2.筛选：使用HSF软件进行剪接潜力评估，筛选出26个高风险（Level 3/4）变异。 3.实验设计：构建p.MMACHC-Full全长Minigene载体，利用定点突变引入变异。 4.实验操作：转染HEK293T细胞，并加入CHX处理验证NMD机制。 5.结果检测（分支）： 分支一：RNA水平（RT-PCR, Sanger测序, 分析异常剪接模式）。 分支二：蛋白水平（Western Blot, 检测表达量及分子量）。 6.临床关联：对比分析c.276G>T与c.276G>A，建立基因型与临床表型（早发vs晚发）的关联。 7.结论：提升VUS变异解读准确性，辅助临床诊断。