

研究框架 (逻辑流),研究内容 (核心板块),关键方法 (技术手段) 提出问题,HPV16 E6-E7 物理互作及其分子基础解析,蛋白制备与生化分析 ↓,1.1 E6/E7 重组蛋白表达纯化与评估 ,密码子优化、SEC、SDS-PAGE 分析问题,1.2 物理结合能力与热稳定性确证 ,BLI (Kd测量)、DSF (Tm值偏移) ↓,1.3 E6-E7 互作界面的原子细节解析,X-射线晶体学 (3.5 Å) 结构模拟与验证,1.4 LxxLL 基序的竞争性拮抗模式验证,结构比对、分子模拟、定点突变 ↓,多尺度空间构象景观与动态分析,多手段构象解析 影响机理研究,2.1 生理环境下 E6-E7 空间排布图谱,In-cell XL-MS、DSSO交联、质谱解析 ↓,2.2 溶液状态构象柔性与折叠效应分析,SAXS、Guinier拟合、Kratky图 功能偶联研究,2.3 活细胞内实时互作与构象切换监测,活细胞 FRET/BRET、荧光寿命成像 ↓,构象依赖的致癌功能调控机制,细胞功能与表型验证 致癌模型构建,3.1 构象锁定/破坏突变体库构建 ,二硫键锁定、Alanine Scanning ↓,3.2 对 p53/pRb 抑癌蛋白降解的调控 ,CHX chase、泛素化实验、Co-IP 结论与应用,3.3 对细胞增殖、周期及恶性表型的驱动 ,CCK-8、RTCA、流式细胞术 学习一下我上传的研究技术路线基本框架,然后帮我绘制技术路线图
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